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做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN BLOT时注意点

做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN BLOT时注意点 | 时间: May-7 13:46:55 | 分类:技术栏目

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做电泳时注意容易出问题,以下问题要注意

1. 跑page胶的时候
小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。
2. 提取质粒的时候
最后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间,最好是空调吹热风,或是37度温箱放长一点的时间,我试过室温过夜,酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的时候
大家往往会摸索一抗、二抗的浓度,封闭时间,曝光时间等等,而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜,甚至重新提蛋白,这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后,将PVDF膜晾干,裁减成小块,保存起来,用的时候取出一块,没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说,节约了大量的时间。

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