western blot电泳的胶怎么放平

western blot电泳的胶怎么放平 | 时间: 2018年4月9日 | 分类:技术栏目

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    最近实验室western blot电泳的胶做出来不够平整,仔细思考一下实验步骤,总结有一下几个方面原因供大家参考

    1)实验用的玻璃板必须洗干净

  2)过硫酸铵和TEMED的加量不合适,加量较多时,凝胶凝固过快也会胶不平,最多按照分子克隆加倍
  3)加完试剂以后没有很好的摇匀,导致有些部位的聚合剂浓度过高,聚合相对较快造成胶不平;
  4)稍微注意手法,均匀加入
  5)灌胶后应该用水或者正丁醇压胶面或用20%的乙醇封顶(没有毒性可以除气泡,使用效果极好)。
  6)边缘胶是不容易聚合完全的,灌完胶后要立即加无水正丁醇覆盖,浓度越低的胶越不要使用双蒸水压顶,另外还可以在压顶试剂如正丁醇中添加少许AP来增加边缘胶的凝聚强度
  7)温度也是影响胶聚合的重要因素,有些同事为了让胶更快的凝固而把胶放到50度的温箱,由于受热不均匀,造成胶聚合不均匀。

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