微型琼脂糖凝胶电泳槽的简易制作

微型琼脂糖凝胶电泳槽的简易制作 | 时间: December-11 14:34:09 | 分类:技术栏目

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摘要
以有机玻璃板等材料,制作出成奉低廉的微型琼脂糖凝胶电泳槽。经试用,具有操作简便、使用安全、节省试剂等优点,能满足教学与科研的需要。

 
琼脂糖凝胶电泳是核酸研究工作中必不可少的工具,在生物化学和分子生物学教学和科研中具有重要作用。琼脂糖凝胶电泳槽的制作原理虽简单,但由于琼脂糖凝胶电泳槽梳子的制作工艺较复杂,且铂金电极价格较高,使目前市场上商品化的琼脂糖凝胶电泳槽价格较高。

本文作者对琼脂糖凝胶电泳技术进行了研究,完成了微型琼脂糖凝胶电泳槽的改进制作。制作出的琼脂糖凝胶电泳槽具有成本低、检测迅速、使用安全、节省试剂、电泳谱带清晰等优点,能满足生物化学和分子生物学教学实验的需要,并已在核酸酶切研究中得到进一步应用。
 
1 制作方法
琼脂糖凝胶电泳槽的制作分为4部分:电泳槽的制作;制胶槽的制作;梳子的制作和盖子的制作。制胶槽和梳子在数量和规格上可以根据实际工作需要适量增减,以便于实验操作。

1.1 电泳槽的制作
选取透明的有机玻璃盒或塑料盒,大小以120mm×lO0mm×50mm左右为佳。在盒子两端同侧各打一孔装上电极插孔,并在两端部各用胶布固定一根细铜丝(胶布只在盒子的角部固定铜丝),即制成琼脂糖凝胶电泳槽。见图1。
 
1.2 制胶槽的制作
截取2 3一厚的透明有机玻璃板,在电热丝上加热,折成“u”形,即成制胶槽。制胶槽两侧板高度以20—25mm为宜。间距应略小于电泳槽;制胶槽的长度约为70—90mm 。见图1。
 
1、3 盏子的制作
用有机玻璃做一“L 形上盖,并在电极插孔的相应位置上打孔,安装电极插头,并将插头固定于上盖的倒板上。见图2。
 
1.4 梳子的制作
选取厚度适宜(1-2m )的透明有机玻璃板,截成(3-5)mm×30mm的窄条,用于梳齿的制作。窄条的边要光滑。以使制出的加样孔比较整齐。取两块lO0mm×15mm有机玻璃板,分别折成“L’,形(长lOOmm,一侧宽5mm,另一侧宽10mm)。将两块折成“L”形的有机玻璃板5mm宽一侧相对,横跨于制胶槽上,在制胶槽的底面垫上1—1.5zr~m厚的有机玻璃薄板,将制好的窄条以2-3mm的间距分别平行固定于两根“L”形板条的5mm宽一倒,窄条下端应整齐地落在垫板上,(注意:两侧窄条与制胶槽应保持2—3mm的间距。)用氯仿固定。
 
 
 
2 使用方法
(1)将制胶槽两端用胶布封好,以纯水检测是否封严;
(2)在合适的位置放好梳子;
(3)加入制好的琼脂糖制成凝胶;
(4)去掉梳子和胶布,将制胶槽放入电泳槽中:
(5)在一侧缓缓加人电泳缓冲液,至液面高于胶面lmm;
(6)接通电源,在100~150V电泳,20min后检测、观察电泳结果。
 
3 电泳槽性能
用本文方法制作的琼脂糖凝胶电泳槽具有以下优点:
(1)成本低。总成本约为l0—20元,是同类市场商品的1/20。
(2)能节约电泳缓冲液用量,一次仅需要160mL左右。
(3)电泳检测迅速,采用100~150V电压,20min即可得到检测结果。
(4)电泳槽各部件可以互换使用,便于维修。
(5)梳子位置可以随意调整,使用方便。
(6)凝胶取出方便,并可在制胶槽中直接进行检测。
(7)打开电泳槽盖子时自动断电,可保证安全。
 
4 应用
该装置已在生物化学实验和分子生物学实验中试用,在质粒DNA的分离检测、DNA酶切片段的电泳检测、连接酶连接结果检测、重组质粒检测等教学实验中.均取得很好的实验结果。通常的琼脂糖凝胶电泳槽在制作中常使用价格较高的铂金丝电极,本文装置利用铜丝代替铂金丝,能满足实验需要.并可大幅度降低成本。但应注意在使用过程中需及时更换铜丝。本装置成本低、电泳缓冲液用量少,适用于科研和教学经费不足、用量又很大的单位。
 

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