荧光显微镜检测支原体

荧光显微镜检测支原体 | 时间: December-7 11:30:41 | 分类:技术栏目

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    检测支原体有两种不同的策略:第一种方法将在下述方案中述及,利用对DNA染

色的荧光染料Hoechst 33258,它对细胞核周围(在细胞表面或胞质中)的特殊DNA物
质进行染色,可显示支原体污染;第二种方法是利用D}LA探针识别细胞提取物中的
DNA支原体特异序列,进行支原体污染的检测。对这个方案,照试剂供应商(Fisher
Scientific)的说明进行。
1)准备下列液体,然后除菌并冷藏。
无酚红的HBSS
NaCI 8g
KCI 0.4g
葡萄糖1.0g
Hoecbot 10x1 x储存液
溶解5mg Hoechst 3328于100mHBSS中,使其终浓度为5。
D.1mol/L柠檬酸22.2ml
用柠檬酸或N4调节pH为5.5
2)滴人1一2滴胰蛋白酶消化细胞于培养皿中的iWek玻片上或盖玻片L}
3y加人1一2r}培养液覆盖表面,让细胞生长2一3天。
4)准备Cat}ay固定液(应在每次用前制备新鲜的
3份甲醉
1份冰
5}吸干培养液,不用洗涤单层细胞并直接加人Carnoy固定液于La}tek室内或培养皿中。培养皿中充满Camoy固定液(约}III} } O室温中放置平皿2分钟去除培养皿中液体。加入新鲜固定液以充满室内或培养皿中(约5m1 }室温中放

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